иммуногистохимическое исследование в диагностике лимфопролиферативных заболеваний: роль ИГХ при биопсии

Лимфопролиферативные заболевания представляют собой группу злокачественных и предрасположенных к злокачественности болезней крови и иммунной системы, для которых точная диагностика имеет критическое значение для выбора тактики лечения. Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) занимает центральное место в современной патологии, позволяя определить не только наличие опухолевого процесса, но и его фенотип, морфологическое направление и вероятность ответа на ту или иную терапию. В сочетании с клиническими данными, морфологией и молекулярной диагностикой ИГХ обеспечивает высокую точность нозологической верификации и помогает различать реактивные изменения узловатыми или диффузными инфильтратами от истинных лимфом.

ИГХ проводится на образцах биопсийного материала, чаще всего биопсии опухоли или лимфатического узла, которые фиксируют в формальдегидном буфере и затем обрабатывают для парафиновой резки. Роль патологоанатома состоит в определении иммунофенотипа клеток, то есть набора поверхностных маркеров, которые позволяют идентифицировать клеточную линию, её функциональное состояние и возможные генетические перестройки. В современных протоколах диагностику дополняют молекулярно-генетические исследования и генетический анализ для выявления специфических перестроек, что позволяет детализировать классификацию лимфом по ВОЗ и прогнозу болезни.

Как проводится ИГХ и какие образцы используют

ИГХ требует качественного биопсийного образца. Основные типы материалов включают:

• многошаровую биопсию узла или ткани лимфатического органа;
• мощную трепанобиопсию опухоли (для глубоких очагов);
• инцизионную или эксцизионную биопсии кожи или слизистых оболочек при соответствующих подозрениях.

Образец обязательно фиксируют в должном объёме формалина или в формалиновом буфере, чтобы сохранить морфологическую структуру и антигенную детектируемость. Затем материал проходит обработку, срезы наносят на слайды и выполняют последовательность иммунохимических реакций. В процессе исследования патологоанатом оценивает:

• маркеры идентификации клеточных линий (например, CD20, CD3 и др.);
• маркеры активации и дифференциации клеток;
• индекс пролиферации (Ki-67);
• маркеры для дифференциальной диагностики конкретных лимфом (например, CD5, CD10, BCL-2, BCL-6, cyclin D1).

Современная практика сочетает ИГХ с молекулярной генетикой и цитогенетикой, что позволяет обнаружить перестройки генов и хронологический контекст опухолевого процесса. В некоторых случаях дополнительно применяют генетическое тестирование для выявления характерных перестроек (например, t(11;14) при лимфоме из клеток мантии или t(14;18) при фолликулярной лимфоме).

Какие маркеры применяют и что они означают

ИГХ-панели подбираются в зависимости от клиники и предполагаемого типа лимфомы. Наиболее распространенные маркеры включают:

• CD20, CD79a — B-клеточные антигенные маркеры;
• CD3, CD2 — T-клеточные маркеры;
• CD5, CD23 — маркеры, помогающие отличать определенные подтипы лимфом В-клеток от других форм;
• CD10 — маркер дифференцировки клеток ЛФЛ (фолликулярная лимфома);
• BCL-2, BCL-6 — регуляторы апоптоза и транскрипционные факторы, важные для определения субклассов;
• cyclin D1 — специфичен для лимфомы из клеток мантии;
• Ki-67 — показатель пролиферативной активности опухоли, помогает оценить агрессивность процесса.
• Дополнительно: PD-L1, CXCL13 и другие маркеры по клинике для уточнения фенотипа и прогноза.

Сочетание маркеров позволяет не только идентифицировать тип лимфомы, но и различать реактивное лимфоузловое поражение от злокачественного. Это особенно важно для планирования терапии, включая таргетные препараты и иммунную терапию.

Роль ИГХ в дифференциальной диагностике лимфом

Дифференциальная диагностика лимфом — сложный процесс, который требует многопрофильного подхода. ИГХ помогает разграничить основные группы:

• Лимфомы Ходжкина и неходжкинские лимфомы, где клеточные фенотипы отличаются по набору маркеров и паттернам экспрессии;
• Лимфомы маргинальной зоны (MALT), фолликулярная лимфома и диффузная крупноклеточная лимфома с различной экспрессией CD20, CD5, CD10 и BCL-2;
• Лимфомы мантии с экспрессией CD5 и циклин-D1;
• Т-клеточные лимфомы (например, периферическая Т-клеточная лимфома, анапластическая крупноклеточная лимфома) с характерной комбинацией пан-Т-клеточных маркеров и дополнительных фенотипических признаков.

Правильная интерпретация ИГХ в сочетании с клиникой и морфологией снижает риск ошибок в диагнозе и позволяет выбрать наиболее эффективную стратегию лечения, улучшая прогноз для пациентов. В некоторых случаях ИГХ дополняется молекулярной диагностикой для поиска специфических генетических изменений, которые влияют на тактику лечения и прогноз болезни.

Как интерпретируют результаты ИГХ

Интерпретация начинается с оценки морфологии клеточных популяций под микроскопом и сопоставления с иммунофенотипом. Важны следующие моменты:

• Постановка наличия или отсутствия опухоли — реактивная лимфаденопатия или лимфопролиферативное заболевание;
• Определение типа клеток — B-клетки vs T-клетки, их дифференцировка и уровень экспрессии маркеров;
• Кластеризация по подтипам лимфом: фолликулярная, маргинальная зона, диффузная крупноклеточная и др.;
• Индекс пролиферации Ki-67 для оценки динамичности заболевания;
• Согласование с клиническими данными и результатами молекулярной диагностики;
• Оценка возможности таргетной терапии или иммунотерапии на основе фенотипа опухоли.

Ключевым остается принцип, что ИГХ — это инструмент фенотипирования и классификации, который должен дополнять морфологию и клинику. Неправильная интерпретация возможно, если качество образца низкое или антигенная детектируемость нарушена преданалитическими факторами. Поэтому критически важна правильная фиксация образца, минимальная задержка в обработке и соблюдение стандартов лабораторной диагностики.

Подготовка к анализу и качество образца

Чтобы получить надежные результаты иммуногистохимического исследования, необходимо соблюдать ряд требований к образцу:

• адекватная биопсия, достаточная по объему, чтобы представить поражение;
• правильная фиксация образца в формалиновом буфере для сохранения антигенной детектируемости;
• минимизация времени между забором материала и фиксацией;
• избежание макроскопического повреждения образца и перекрестного загрязнения;
• профессиональная обработка и грамотная интерпретация под руководством патологоанатомов с опытом в гистологии лимфопролиферативных заболеваний.

Пациентам важно обсуждать с врачами любые вопросы, касающиеся подготовки к диагностическим процедурам, однако для ИГХ обычно специальных предоперационных требований не требуется, кроме общих рекомендаций по обследованию и предоперационному планированию. Результаты ИГХ должны быть интегрированы с клиническими данными, результатами других лабораторных тестов и молекулярной диагностики для формирования окончательного диагноза и плана лечения.

Применение результатов ИГХ в клинике

На практике иммуногистохимическое исследование играет роль не только в постановке диагноза, но и в выборе терапии. Зная точный иммунофенотип опухолевых клеток, клиницисты могут определить, подходит ли пациенту определенный таргетный препарат, ингибитор сигнальных путей или иммунную терапию. Кроме того, данные об экспрессии маркеров помогают прогнозировать динамику болезни, риск рецидива и потенциальную устойчивость к терапии. В условиях специализированной лаборатории ИГХ обеспечивает возможность проведения повторной оценки при необходимости контроля эффекта лечения.

ИГХ наряду с клинико-генетическим подходом позволяет формировать индивидуальные схемы ведения пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями. Это особенно важно в случаях редких или атипичных фенотипов, где точная идентификация подтипа лимфомы может существенно повлиять на исход лечения.

Заключение

Индивидуальная и точная диагностика лимфопролиферативных заболеваний невозможна без качественного иммуногистохимического исследования. Правильно подобранная панель маркеров, сочетание фенотипирования с морфологией и молекулярной диагностикой позволяют не только определить диагноз, но и выбрать оптимальную стратегию лечения, повысить прогноз и качество жизни пациентов. Современная практика требует тесного взаимодействия между клиниками и патологоанатомами, чтобы каждый пациент получил персонализированный подход, основанный на всесторонней оценке биопсийного материала и клинических данных.