Иммуногистохимическое исследование (ИГХ): диагностика лимфопролиферативных заболеваний на биоматериале, фиксированном в парафинном блоке

Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) является ключевым инструментом современной патологической диагностики, позволяющим не просто увидеть структуры ткани, но и определить их биологическую сущность на клеточном уровне. В контексте лимфопролиферативных заболеваний ИГХ служит для точной классификации лимфом и ряда других патологических состояний, помогая врачу выбрать оптимальную тактику лечения. В нашей клинике Медальянс мы используем ИГХ на биоматериале, фиксированном в парафинном блоке (FFPE), что обеспечивает долговременную сохранность исследуемого материала и возможность повторной оценки при необходимости.

Зачем нужен иммуногистохимический анализ в диагностике лимфопролиферативных заболеваний

ИГХ дополняет морфологическую оценку образца, позволяя установить происхождение клеток по их поверхностным и внутриклеточным маркерам. Это особенно важно при дифференциальной диагностике между разными типами лимфом, а также между лимфомами и реактивными лимфоидными гиперплазиями. Благодаря панели маркеров можно определить линейность клеток (B- или T-клеточную), их степень зрелости и характер клеточной пролиферации. Такой подход существенно влияет на прогноз и выбор схемы лечения.

Подготовка образца и особенности биоматериала

Эффективность ИГХ во многом зависит от качества образца. В большинстве случаев исследование выполняется на биоматериале, фиксированном в парафинном блоке (FFPE). Этот метод позволяет сохранить структурную архитектуру ткани и сохранить antigenic epitopes подлежащими распознаванию антителами. Перед исследованием ткань подвергается процессу декальцинации (при необходимости), сшиванию с парафином и срезам толщиной обычно 3–5 микрон. Затем выполняется антигенной извлечения (retrieval), которая восстанавливает доступ антигенов, сомкнувшихся после фиксации, чтобы антитела могли эффективно взаимодействовать с целевыми белками.

Ключевой аспект подготовки — минимизация преданалитических факторов: время фиксации, последовательность обработки, температуру и условия хранения образцов. Неправильная фиксация или задержка в обработке может привести к ложноположительным или ложноотрицательным результатам. Поэтому для ИГХ мы применяем строгие протоколы контроля качества и используем валидацию известных антивенов и клеонов, адаптированных под парафиновые блоки.

Какие маркеры применяются в панели ИГХ для лимфопролиферативных заболеваний

Для определения клеточной линии, типа лимфомы и ее подтипа применяют набор антител, ориентированных на специфические белки клеток. Основные группы маркеров включают:

• B‑клеточные маркеры: CD20, CD79a, PAX5; позволяют идентифицировать B-клеточные лимфомы и отличать их от T-клеточных поражений.
• T‑клеточные маркеры: CD3, CD4, CD8; необходимы для распознавания T-клеточных процессов и определения доминирующей линии клеток.
• Герминальные и дифференциальные маркеры: CD10, BCL6, MUM1/IRF4; помогают различать подтипы фолликулярной лимфомы и другие лимфоматозные состояния.
• Функциональные и регуляторные маркеры: BCL2, Cyclin D1; полезны для идентификации особенностей пролиферативной активности и конкретных подтипов (например, Cyclin D1 при mantle cell lymphoma).
• Показатель пролиферации: Ki-67; оценивает клеточную пролиферацию и помогает в оценке агрессивности лимфомы.
• Дополнительные маркеры по клиническому сценарию: MYC, IRF4, EBER (для вирусной диагностики), и др.; их применение зависит от предполагаемой диагностики и исходной морфологии.

Комбинация таких маркеров формирует характерный профиль иммуногистохимической картины, который интерпретируется патологоанатомом в контексте клинико-патологических данных. Важно помнить, что интерпретация результатов ИГХ всегда проводится в синергии с морфологическими особенностями ткани и клиническими данными пациента.

Как интерпретировать результаты ИГХ в контексте лимфопролиферативных заболеваний

Интерпретация ИГХ — это многоступенчатый процесс. Во-первых, определяется линейность клеток — B‑клеточная, T‑клеточная или NK/T‑клеточная линия. Во-вторых, анализируется выражение конкретных маркеров, что позволяет сузить круг подозрений и выделить подтип лимфомы. В-третьих, учитываются эпителиальные и герминальные маркеры, чтобы отличить лимфому от вариаций реактивной лимфоплазии. Наконец, Ki-67 оценивает темп пролиферации, что в сочетании с другими данными может указывать на более агрессивную картику заболевания.

Ключевые принципы интерпретации:

• Б-клеточные лимфомы обычно демонстрируют положительность маркеров CD20/CD79a в подавляющем большинстве клеток, а иногда сочетание CD5, CD23 или других маркеров помогает сузить subtype.
• Т‑клеточные лимфомы характеризуются доминированием маркеров CD3, с вариациями по CD4/CD8 и дополнительным анализом маркеров специфических подтипов.
• Для фолликулярной лимфомы полезны маркеры CD10 и BCL6, в то же время BCL2 обычно выражается в клетках, образующих гистологические структуры фолликулов.
• Cyclin D1 является характерным маркером mantle cell lymphoma (МКЛ); его положительность существенно меняет тактику лечения.
• Маркеры пролиферации KI‑67 помогают оценить активность опухоли, что имеет прогностическое значение для некоторых подтипов.

Важно отметить, что некоторые клинические сценарии требуют определения клеточной клиники по нескольким образцам или дополнительной молекулярной диагностики. Поэтому заключение по ИГХ формируется как интегративная оценка, где результаты панели маркеров дополняют клинические данные, и окончательное решение принимает квалифицированный патологоанатом.

Нормальные значения и трактовка повышенных/сниженных показателей

В контексте лимфопролиферативных заболеваний нормальные «значения» выраженности маркеров не существуют в виде абсолютной нормы, поскольку речь идет о патологии клеток. Однако существуют характерные диапазоны и паттерны, которые помогают отличать патологию от реактивной лимфоплазии. Например:

• Повышенная пролиферативная активность (высокий Ki-67) может свидетельствовать об агрессивной лимфоме или интенсивном участии ткани; однако Ki-67 следует оценивать в сочетании с другими маркерами и морфологией.
• Неполное или неоднородное выражение маркеров может указывать на гибридные или необычные подтипы, требующие дополнительной молекулярной диагностики.
• Сохранение или потеря определённых маркеров (например, CD20 в определённых случаях) может влиять на выбор терапии, в том числе на применение антителевой терапии.

В целом, трактовка результатов ИГХ основывается на паттерне выраженности маркеров, а не на единичном маркере. Это позволяет минимизировать риск ошибочной классификации и обеспечить максимально персонализированный подход к лечению.

Практические аспекты применения ИГХ в клинике Медальянс

В нашей клинике Медальянс ИГХ проводится по строгим протоколам с применением многоступенчатых панелей маркеров и контролируемых условий анализа. Это обеспечивает надежную диагностику и возможность повторной оценки образца при необходимости. Прежде чем формировать заключение, мы учитываем:

• морфологические характеристики ткани,
• клиническую картину и подозрения врача,
• результаты панельных маркеров и, при необходимости, молекулярно-генетические тесты,
• качество образца и корректность фиксации.

ИГХ для парафиновых блоков — мощный инструмент, который позволяет получить точную картину клеточного ландшафта, значительно улучшая дифференциальную диагностику между лимфомами и реактивными процессами. Результаты ИГХ интегрируются в общий клинико-лабораторный контекст и служат основой для выбора схемы лечения, мониторинга ответа на терапию и прогноза.

Кейс-ориентированный подход и примеры применения

Рассмотрим общую схему, как ИГХ может помочь в клинической практике. При подозрении на лимфому врач может направить образец на панель маркеров, чтобы определить, является ли процесс B‑клеточным или T‑клеточным, а затем сузить подтип в зависимости от комбинации маркеров. Например:

• Если набор маркеров демонстрирует сильную экспрессию CD20 с сопутствующим положительным CD5, это может указывать на определённый подтип B‑клеточной лимфомы; дальнейшее тестирование может включать CD23, Cyclin D1 и BCL2 для уточнения диагноза.
• Паттерн CD3 с доминированием CD4 или CD8 указывает на T‑клеточную линию, что требует специфического подхода к диагностике и лечению.
• Комбинация CD10/BCL6/CD5 с отсутствием CD23 может свидетельствовать о фолликулярной лимфоме или о другой гистологической форме; здесь решающими становятся дополнительные маркеры и морфология.

Важно, что каждый случай оценивается индивидуально, и принципы ИГХ применяются не изолированно, а в тесном взаимодействии между патологами, клиницистами и молекулярными лабораториями.

Чего ждать от результата ИГХ и как использовать данные на практике

Результаты ИГХ предоставляют патологоанатомическое заключение, подкрепленное визуализацией конкретных клеточных линий и их маркеров. Пациенту и лечащему врачу такие данные помогают: определить точный тип лимфомы, выбрать наиболее эффективную терапию и оценить потенциальные механизмы резистентности. Кроме того, ИГХ часто позволяет определить необходимость дополнительной молекулярной диагностики или биопсии повторно в случае необходимости уточнения диагноза.

Рекомендации по подготовке к исследованию и взаимодействию с лабораторией

Чтобы получить наиболее точный результат, важно подготовиться к исследованию и соблюдать рекомендации по биоматериалу. Это включает своевременную доставку образца в лабораторию, соблюдение условий фиксации и предоставление клинических данных, способствующих интерпретации результатов. При необходимости можно запросить консультацию патологоанатома, чтобы обсудить предполагаемые подтипы лимфомы и набор маркеров, которые будут включены в панель.

Заключение

Иммуногистохимическое исследование на биоматериале, фиксированном в парафинном блоке — это фундаментальный инструмент для точной диагностики лимфопролиферативных заболеваний. Оно обеспечивает детальное определение клеточной линии, подтипа и уровня пролиферации, что напрямую влияет на выбор лечения и прогноз. В клинике Медальянс мы стремимся к максимальной точности и индивидуальному подходу, сочетая морфологическую оценку, панель маркеров ИГХ и, при необходимости, молекулярную диагностику, чтобы каждый пациент получил наилучшее возможное ведение. Если у вас есть вопросы по проведению иммуногистохимического исследования или требуется экспертная оценка образца, обращайтесь к нашим специалистам — мы поможем определить оптимальную стратегию диагностики и терапии.