Диагностика и лабораторные исследования при Синдроме Паллистера-Холла
Синдром Паллистера-Холла — редкое генетическое заболевание, связанное с нарушениями развития центральной нервной системы и скелета. Для точной постановки диагноза и планирования дальнейшего наблюдения необходимы профессиональные молекулярно-генетические и цитогенетические исследования. В этой статье мы подробно расскажем о показаниях к обследованию, доступных методах лабораторной диагностики, видах биоматериала и о том, какие результаты можно получить при разных подходах.
Краткое описание болезни и когда думать о генетическом тестировании
Синдром Паллистера-Холла обусловлен патогенными вариантами в гене GLI3 и чаще всего проявляется сочетанием центральных и внешних признаков: гипоталамический гамартома, полидактилия, дефекты верхних дыхательных путей (например, раздвоение надгортанника), дисплазии анального канала, задержка развития и гормональные нарушения. При наличии сочетания описанных клинических симптомов, особенно гипоталамической гамартомы и полидактилии, показано молекулярно-генетическое обследование для подтверждения диагноза.
Цели лабораторной диагностики
- подтверждение точного генетического диагноза;
- установление причины врождённых аномалий и неврологических симптомов;
- оценка риска рецидива в семье и проведение наследственного консультирования;
- возможность пренатальной или предимплантационной диагностики при наличии известного патогенного варианта.
Молекулярно-генетические методы, применяемые при подозрении на синдром
Для выявления патогенных вариантов, приводящих к Синдрому Паллистера-Холла, используются следующие лабораторные методы:
- Секвенирование гена GLI3 — целевое секвенирование всего кодирующего региона и интрон-экзонных границ. Позволяет выявлять однонуклеотидные замены и небольшие инделы.
- Многоуровневое NGS-секвенирование (панель генов) — при неясной клинической картине рекомендуется панель, включающая GLI3 и другие гены, ассоциированные с гамартомами, полидактилией и синдромальными формами задержки развития.
- Экзомное (WES) или геномное (WGS) секвенирование — при отрицательном целевом исследовании и сохраняющемся клиническом подозрении; может выявить редкие или неожиданные причины.
- MLPA и количественные методы — для выявления делеционных или дупликационных событий в GLI3, которые могут быть причиной синдрома.
- Глубокое NGS-сканирование для выявления мозаицизма — поскольку часть случаев обусловлена постзиготическим мозаицизмом, стандартные методы на периферической крови могут давать ложноотрицательный результат. Для этого используются методы с высокой глубиной покрытия и анализ биоматериала от поражённых тканей.
Цитогенетические и молекулярно-цитогенетические исследования
Хотя Синдром Паллистера-Холла чаще всего связан с точечными вариантами в GLI3, целесообразно проводить также:
- Хромосомный анализ (кариотип) — при множественных врождённых дефектах для исключения структурных перестроек хромосом;
- Микроаррейный анализ (CMA) — для выявления микроделеции/микродубликации, которые могут сопровождать сложные фенотипы. Однако CMA не всегда детектирует низкоуровневый мозаицизм;
- Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) — при необходимости подтвердить сомнительные изменения копийности или локализовать перестройки.
Выбор биоматериала: что исследовать
Качество и информативность анализа во многом зависят от типа полученного материала. Частые варианты биоматериала:
- Периферическая кровь — основной и удобный источник ДНК, подходит для большинства исследований, но при мозаицизме могут быть ложные отрицательные результаты;
- Поражённые ткани (например, кожа, биоптат гамартомы, эпителиальный материал) — часто дают более высокую чувствительность при мозаицизме;
- Слизистая ротовой полости (соскоб) — альтернатива крови для повышения шансов обнаружить мозаичные варианты;
- Амниотическая жидкость, ворсинки хориона — для пренатальной диагностики при известном семейном варианте;
- Фибробласты кожи — применяются при подозрении на мозаицизм и при отрицательном результате исследования крови.
Преимущества и ограничения различных методов
Каждый метод имеет свои сильные и слабые стороны:
- Таргетное секвенирование GLI3 — высокая специфичность и чувствительность для точечных вариантов, но не всегда детектирует структурные изменения и низкоуровневый мозаицизм.
- Панели NGS — удобно при клинической неоднозначности, позволяет параллельно исследовать несколько генов, но требует грамотной интерпретации вариантов.
- Экзом/WES — хорош для поиска неожиданных причин, но может выявлять варианты неизвестного клинического значения и требует подтверждения другими методами.
- MLPA/CMA — надёжны для изменений копийности, но не подходят для обнаружения точечных мутаций.
- Методы для выявления мозаицизма — глубинное секвенирование и анализ образцов из разных тканей значительно повышают вероятность обнаружения обуславливающих заболевание вариантов.
Показания к проведению тестов и подготовка пациента
Обследование рекомендовано при сочетании характерных клинических признаков: гипоталамическая гамартома, специфическая форма полидактилии, врождённые аномалии ануса и верхних дыхательных путей, задержка психомоторного развития. Также тестирование показано для:
- подтверждения диагноза у пациента с подозрением на синдром;
- династического обследования при наличии родственников с подтверждённым вариантом;
- пренатальной диагностики при известном варианте в семье.
Подготовка пациента обычно минимальна: для анализа ДНК требуется стандартный забор периферической крови в EDTA-трубке или соскоб эпителия ротовой полости. Для специфичных исследований (биопсия кожи, амниоцентез) применяются другие протоколы и условия подготовки, которые оговариваются врачом.
Интерпретация результатов
Результат молекулярного исследования может быть:
- Положительный — обнаружен патогенный или вероятно патогенный вариант в гене GLI3, что подтверждает диагноз. В этом случае рекомендуется семейное обследование и консультация клинического генетика.
- Негативный — в крови патогенных вариантов не обнаружено. При высоком клиническом подозрении рекомендуется дополнительное исследование других тканей или более чувствательные методы для выявления мозаицизма.
- Вариант неизвестного клинического значения (VUS) — требует дальнейшей интерпретации, семейного тестирования и функциональных исследований при возможности.
Клиническое и практическое значение подтверждённого диагноза
Подтверждённый генетический диагноз при Синдроме Паллистера-Холла имеет несколько важных последствий:
- оптимизация медицинского наблюдения (контроль эндокринных нарушений, мониторинг эпилепсии и поведенческих проблем);
- возможность целенаправленной терапии и планирования хирургических вмешательств при анатомических дефектах;
- наследственное консультирование и оценка риска для будущих детей;
- включение в специализированные регистры и программы поддержки при редких заболеваниях.
Советы по выбору лаборатории и взаимодействию с врачом
При выборе лаборатории обратите внимание на её опыт в молекулярно-генетической диагностике редких заболеваний, аккредитацию, наличие специализированных панелей и возможности по глубокому секвенированию и MLPA/CMA. Важно, чтобы лаборатория предоставляла подробный заключительный отчёт с интерпретацией и рекомендациями, а также возможность консультации с клиническим генетиком или молекулярным биологом для разбора результатов.
Заключение
Синдром Паллистера-Холла — сложное генетическое состояние, требующее продуманного подхода к диагностике. Молекулярно-генетические тесты, в первую очередь исследование гена GLI3, панельные NGS-методы, а при необходимости и экзомное секвенирование, позволяют подтвердить диагноз, определить механизм заболевания и разработать план наблюдения. Важным аспектом является учет возможного мозаицизма, что может потребовать исследования биоматериала из разных тканей и использования высокочувствительных методов.
Если у вас есть клиническое подозрение на Синдром Паллистера-Холла или вы планируете семейное обследование, обсудите с врачом необходимость молекулярно-генетического анализа и выбор оптимального метода и биоматериала для исследования.