Определение экспрессии мРНК BCR-ABL p210 (количественное) — Хронический миелолейкоз

В современном течении диагностики и мониторинга Хронического миелолейкоза ключевым параметром служит определение экспрессии мРНК BCR-ABL p210 в крови или костном мозге. Этот количественный анализ экспрессии позволяет врачу оценить активность патологического транслокационного процесса, который лежит в основе болезни, и следить за динамикой ответа на лечение. В данной статье мы разберём, что представляет собой BCR-ABL p210 экспрессия, какие задачи решает метод, как правильно готовиться к исследованию и какие значения считать нормальными, повышенными или пониженными.

Зачем нужен анализ экспрессии BCR-ABL p210

При Хроническом миелолейкозе основной патологический фактор — это обмен генетическими материалами между хромосомами 9 и 22, в результате чего образуется ген BCR-ABL. Именно он продуцирует комбинированный онкогенный белок, влияющий на пролиферацию клеток крови. Определение экспрессии мРНК BCR-ABL p210 даёт возможность:

• установить исходный уровень болезни и сформировать план терапии;
• контролировать эффективность лечения препаратами-ингибиторами тирозинкиназ(ИТК), которые направлены на блокировку активности BCR-ABL;
• отслеживать динамику снижения мРНК-уровня по мере достижения молекулярного ответа и Major Molecular Response (MMR);
• ранее выявлять резистентность к лечению и корректировать схему терапии.

Важно понимать, что данный анализ является инструментом мониторинга, а не единым диагнозом. Он помогает врачам оценивать эффективность лечения и прогнозировать долгосрочный исход при Хроническом миелолейкозе.

Что именно измеряется и как это работает

Методика основана на измерении количества транскриптов BCR-ABL1 относительно контрольного гена, обычно ABL, в единицах, приводящих к так называемой международной шкале IS. Результаты выражаются как процентное соотношение BCR-ABL1 к контролю (BCR-ABL1/ABL1) и приводятся к IS, что позволяет сравнивать данные между лабораториями и пациентами по всему миру.

Основная суть количественного анализа экспрессии состоит в высокочувствительном определении мРНК BCR-ABL1 с помощью метода обратной транскрипции и количественного ПЦР (RT-qPCR). Этот подход способен детектировать очень низкие уровни транскриптов, что критично для оценки глубины ответа на лечение и для принятия решений о смене тактики терапии при необходимости.

Подготовка к анализу

Традиционно подготовка к исследованию связана с качеством образца крови или костного мозга. В медицинской практике чаще используется стационарная заборная биоматериал и соблюдение стандартов pré-аналитической обработки. Важные моменты включают:

• соблюдение стандартной техники забора крови и правильная обработка образца;
• использование антикоагулянта EDTA в качестве средства-preserve для крови;
• избежание длительного хранения образцов без надлежащего охлаждения;
• при необходимости повторных тестов — единая методика и единицы измерения во избежание вариаций между пробыми.

Перед проведением исследования пациенты обычно получают объяснение о цели теста и о том, что результаты позволят более точно следить за динамикой болезни. Важно помнить, что конкретные требования к подготовке может устанавливать назначивший лечащий врач и лаборатория, поэтому следует следовать их инструкциям.

Методика проведения анализа

Ключевые этапы количественного анализа экспрессии BCR-ABL p210 включают:

1. извлечение РНК из образца крови или костного мозга;
2. обратную транскрипцию РНК в комплементарную ДНК (кДНК);
3. проведение количественного ПЦР-анализа с использованием праймеров и зондов, специфичных к транскриптам BCR-ABL1;
4. нормирование полученных значений по контрольному гено́му и приведение к международной шкале IS для сопоставимости с клиническими стандартами.

В результате пациент получает показатель в процентах, отражающий долю BCR-ABL1 по отношению к контрольному гену, после чего врач может определить динамику лечения:

• возможность достижения Major Molecular Response (MMR) — снижение уровня BCR-ABL1 до очень низких значений;
• регулярный мониторинг для выявления рецидивов или устойчивости к терапии;
• оценку эффективности применяемых ингибиторов тирозинкиназ.

Нормальные значения и их интерпретация

У здоровых людей выраженность BCR-ABL обычно не обнаруживается на уровне, который можно использовать для клинических выводов. Поэтому нормальные значения чаще трактуются как отсутствие détectable BCR-ABL1 транскриптов на практике. В контексте мониторинга Хронического миелолейкоза результаты приводят к IS-значениям, где:

• исходный уровень часто существенно выше 0, затем происходит снижение в процессе лечения;
• MMR обычно определяется как BCR-ABL1 IS ≤ 0.1%;
• низкие значения IS свидетельствуют о глубоком молекулярном ответе.

Важно отметить, что цели по IS-уровням могут варьировать в зависимости от возраста, стадии болезни, применяемой схемы лечения и клинических рекомендаций. Количественный анализ экспрессии играет ключевую роль в принятии решений о коррекции терапии и времени перехода к альтернативным подходам.

Повышенные значения

Повышение уровня BCR-ABL1 может указывать на активность заболевания или резистентность к текущему лечению. Факторы, способствующие увеличению транскриптов, включают:

• неполную эффективность ингибиторов тирозинкиназ;
• проблемы с adherens к препарату или усиление клинической резистентности;
• вариации в биологических образцах и pre-analytical факторы;
• побочные эффекты или смена схемы лечения, если предшествующее лечение уже не обеспечивает желаемого молекулярного снижения.

Стабильно повышенные значения требуют клинической оценки, пересмотра плана лечения, возможной смены препарата или корректировки дозировки. Однако трактовку результатов должен выполнять лечащий врач, учитывая клинику, историю болезни и сопутствующие анализы.

Сниженные значения и молекулярный ответ

Снижение BCR-ABL1 в процессе терапии свидетельствует о глубоком молекулярном ответе. Ключевые ориентиры включают:

• MMR — BCR-ABL1 IS ≤ 0.1%;
• глубокие ответы могут сопровождаться дальнейшим снижением до менее заметных уровней;
• циях по контролю и ведению пациентов следует регулярно проводить мониторинг, чтобы подтверждать устойчивость молекулярного ответа и при необходимости корректировать лечение.

Достижение и поддержка молекулярного ответа ассоциируются с лучшими прогнозами по выживанию и снижением риска прогрессирования заболевания. В ряде случаев врач может рассмотреть возможность длительной персистентной терапии или постепенное снижение интенсивности лечения, если молекулярные показатели остаются стабильными на низком уровне.

Интерпретация результатов в клинической практике

Результаты анализа экспрессии BCR-ABL p210 служат одним из главных ориентиров для решения о продолжении или изменении терапии. Практические принципы:

• начальный высокий уровень BCR-ABL1 требует немедленного контроля и подбора эффективного ингибитора тирозинкиназ;
• постепенное снижение уровня BCR-ABL1 по мере времени и достижение MMR свидетельствует о благоприятном течении болезни;
• неустойчивость к лечению или резистентность — сигнал к смене тактики, возможно, к изменению препарата или добавлению дополнительных подходов;
• мониторинг должен проводиться регулярно в лабораториях с применением единых стандартов IS для сопоставимости результатов.

Часто задаваемые вопросы

В каком формате показывают результаты? Результаты выражаются в процентах в зоне IS и дают возможность сравнивать данные между лабораториями и между визитами пациента. Как часто нужно сдавать анализ? Частота зависит от стадии болезни и плана лечения: чаще на старте лечения, затем по протоколу врача, как минимум периодически для контроля глубины молекулярного ответа. Что делать, если результат выше нормы? Необходимо обсудить с лечащим врачом возможные коррекции лечения, возможную смену терапии или дополнительные исследования для исключения резистентности и оценки клинической ситуации.

Вывод

Определение экспрессии мРНК BCR-ABL p210 — это краеугольный элемент мониторинга Хронического миелолейкоза. Этот количественный анализ позволяет не только оценить текущее состояние болезни, но и предвидеть ответ на лечение, измерять глубину молекулярного отклика и вовремя корректировать терапию. Пациентам и врачам он помогает достигать лучших клинических результатов за счёт точной оценки молекулярной динамики. Следование рекомендациям по методике и регулярному мониторингу обеспечивает ясную картину прогноза и позволяет принимать взвешенные решения в рамках комплексного ведения Хронического миелолейкоза.