Определение статуса HER2 в опухоли с использованием иммунофлуоресцентной гибридизации in situ (FISH)

В современном онкологическом диагностическом арсенале определение HER2 статуса опухоли с помощью иммунофлуоресцентной гибридизации in situ (FISH) занимает особое место. Этот метод позволяет получить точную информацию о генетической амплификации и экспрессии HER2 на уровне отдельных клеток, что критически важно для выбора стратегий лечения и прогноза. В отличие от некоторых других методов, FISH in situ дает прямую визуализацию копий гена HER2 в клетках опухоли, что повышает надёжность оценки по сравнению с анализами на уровне белка или мРНК в отдельных случаях.

Зачем необходима диагностика статуса HER2

HER2 (human epidermal growth factor receptor 2) — это ген и соответствующий белок рецептор на поверхности ряда клеток. У ряда опухолей, прежде всего молочной железы и желудочно-кишечного тракта, амплификация или избыточная экспрессия HER2 связана с особенностями клинико-морфологических характеристик, агрессивностью течения и реакцией на специфическую таргетную терапию. Определение HER2 статуса позволяет врачам принимать обоснованные решения относительно использования антитело-таргетной терапии, такой как таргетные препараты, и прогнозировать возможность ответа на лечение. В клинических протоколах этот анализ рассматривается как ключевой фактор для подбора персонализированной схемы лечения.

Подготовка к анализу

Для получения надежных результатов необходимо качественное биоматериальное сырьё. Обычно анализ проводится на образцах ткани, фиксированной в формалине и закрепленной в парафине (FFPE). Важны следующие аспекты подготовки: достаточное опухолевое содержимое в секции, минимизация ткани нормальных структур в зоне исследования, правильная фиксация и обработка образца. Качественная подготовка образца напрямую влияет на точность определения числа копий гена HER2 и достоверность вычисляемого коэффициента HER2/CEP17, который используется для интерпретации результатов.

Методика проведения анализа

Метод FISH in situ строится на использовании меток-флуорохромов, специфичных к гену HER2 и к контрольному участку хромосомы 17 (CEP17). В процессе исследования оцениваются два параметра на клетку: число копий гена HER2 и число копий контрольной области CEP17. На их основе рассчитывают коэффициент HER2/CEP17. Общепринятая логика такова: амплификация HER2 определяется при коэффициенте HER2/CEP17, превышающем пороговое значение (обычно ≥2,0 в контексте конкретной методики), что указывает на избыточное копирование гена. В случаях, когда коэффициент ниже порога, говорят о неконсолидированной экспрессии, а при близких к порогу значениях могут применяться дополнительные тесты или повторы исследования.

Процедура проводится под микроскопом с использованием специализированного оборудования в очагах лаборатории. Интерпретацию выполняют квалифицированные цитологи или патологи, имеющие опыт работы с молекулярной диагностикой. Важно, что метод позволяет оценивать не только наличие амплификации, но и распределение сигнала в клетках, что помогает различать реальный биологический сигнал от технических артефактов.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов FISH-анализа строится на сочетании двух факторов: коэффициента HER2/CEP17 и визуального характера сигналов ряда клеток. Общая идея такова:

• Амплификация HER2: коэффициент HER2/CEP17 ≥ 2,0, а сигнал гена HER2 заметно сильнее или число копий существенно выше нормы. Такой результат часто ассоциируется с возможной эффективностью таргетной терапии против HER2.
• Нормальная экспрессия: коэффициент ниже порога (обычно < 2,0), количество копий гена в пределах нормы, отсутствие выраженного доминирования сигнала по сравнению с CEP17. В таких случаях таргетная терапия против HER2 может не давать ожидаемого эффекта.
• Неопределённость/Эquivокальность: значения близки к пороговым или встречаются смешанные сигналы. В таких случаях часто требуется повторение теста, альтернативные молекулярные методы или оценка по дополнительным клинико-морфологическим данным.

Важно учитывать, что конкретные пороги и методические подходы могут варьировать в зависимости от протоколов лаборатории и применяемых коммерческих наборов. Поэтому интерпретацию следует осуществлять согласно локальным руководствам и стандартам качества, принятым в соответствующей клинике.

Нормальные значения и их смысл

В рамках нормальных значений HER2 обычно речь идёт о отсутствующей амплификации и отсутствии выраженной рестрикции сигнала гена. Так как у большинства пациентов наблюдается диапазон вариабельности сигналов, клиницисты рассматривают результат в контексте клинической картины и других лабораторных данных. В целом, нормальная/отрицательная оценка свидетельствует о том, что мишень на уровне HER2 не является биологически преимуществной для применения препаратов, направленных против HER2, как правило, без дополнительных факторов риска или конкретной клинической ситуации.

Повышенные показатели и их клиническое значение

Повышенные показатели HER2 указывают на амплификацию гена и/или высокую экспрессию белка. В таких случаях врачи часто рассматривают возможность использования таргетной терапии, направленной на HER2, совместно с другими методами лечения. При этом важно понимать, что результат FISH — один из элементов комплексной оценки, и решение о терапии принимает мультидисциплинарная команда, учитывая стадию болезни, общую клиническую картину и сопутствующие факторы. Точная интерпретация может зависеть от интерпретации порогов методики и качества образца.

Снижение показателей и возможные причины

Снижение или отсутствие амплификации не исключает клинической значимости HER2 в некоторых случаях, однако чаще всего такие результаты исключают применение таргетной терапии против HER2 как стандартного подхода. В отдельных ситуациях могут рассматриваться дополнительные молекулярные тесты или повторная оценка образца, особенно если клинические данные противоречат молекулярным выводам. В любом случае, интерпретация FISH должна основываться на консенсусе в рамках клиники и руководств по диагностике HER2.

Ограничения метода и качество анализа

Как и любой молекулярный тест, FISH in situ имеет ограничения. К ним относятся:

• неоднородность опухоли и неоднородность сигнала в разных участках образца;
• потребность в достаточном tumour cell content в секции;
• возможные артефакты фиксации, сдвиги при подготовке образца и технические погрешности при интерпретации сигналов;
• вариации порогов в зависимости от применяемого набора probes и лабораторной практики.

Чтобы минимизировать риски и повысить воспроизводимость результатов, лаборатории применяют строгие протоколы качества, включающие валидацию методик, внешнюю качественную оценку и внутренний контроль за каждым этапом анализа. В таких условиях результаты можно трактовать с высокой степенью уверенности, что является основой для обоснованного подбора терапии.

Практические аспекты внедрения в клинику Медальянс

Для пациентов клиники Медальянс определение статуса HER2 с помощью FISH in situ — это часть комплексной диагностики, направленной на персонализацию лечения. Мы ориентируемся на современные клинико-молекулярные стандарты, обеспечивая высокую точность и прозрачность процесса анализа. В рамках каталога услуг мы стремимся предоставить подробную информационную страницу об анализе и связанной с ним информативной статье, отвечающей на вопросы: для чего необходим анализ, подготовка к анализу, методика проведения анализа, о чем говорят результаты, нормальные значения, повышенные показатели, сниженные значения. Если возникают вопросы, мы используем проверенные подходы и адаптируем материалы под потребности пациентов, избегая упоминания конкурентов и предоставляя объективную полезную информацию.

Ключевые моменты и выводы

Метод иммунофлуоресцентной гибридизации in situ (FISH) для определения HER2 статуса предоставляет детальную генетическую информацию на уровне клеток опухоли, что позволяет оценить целесообразность таргетной терапии и выбрать наиболее эффективную стратегию лечения. Интерпретация результатов строится на сочетании коэффициента HER2/CEP17 и визуального сигнала, а современные протоколы обеспечивают надёжность и воспроизводимость анализа. В клинике Медальянс мы придерживаемся принципов прозрачности и клинической значимости формулировок, чтобы пациенты получали понятное и информированное объяснение результатов исследования, без лишних предположений и с опорой на проверенные данные. Если анализ проводится впервые или данные противоречат клиническим ожиданиям, команда специалистов может предложить повторную оценку или альтернативные тесты, чтобы исключить неопределённость и обеспечить точное направление дальнейшего лечения.