Парвовирус В19, определение ДНК

Краткое описание исследования «Парвовирус В19, определение ДНК в сыворотке крови»

Парвовирус В19 представляет собой одноцепочечный ДНК-вирус без оболочки. семейства Parvoviridae рода Erythroparvovirus. Парвовирус субтипа B19 – единственный патогенный для человека член этого семейства. Во время острой инфекции вирус может присутствовать в крови, жидкостях ротовой полости, различных тканях. С учетом особенностей тропизма этого вируса (см. ниже), оптимальным материалом для выявления вируса обычно считается кровь.

Парвовирусная В19 инфекция – широко распространенное инфекционное заболевание с широким спектром клинических проявлений. Это частая детская инфекция (известен как «пятая болезнь», поскольку исторически был пятым в списке распространенных детских заболеваний, сопровождаемых сыпью), у большинства детей обычно легкая и практически не требующая лечения. У людей с некоторыми видами анемии и нарушениями иммунитета парвовирусная инфекция может иметь более серьезные проявления, связанные с нарушениями кроветворения. У части беременных женщин острая парвовирусная инфекция может привести к серьезным проблемам для плода.

Отсутствие липидной оболочки делает парвовирус одним из наиболее устойчивых во внешней среде. Он хорошо выдерживает замораживание, нагревание до 60°С в течение 1 часа и воздействие различных дезинфицирующих растворов.

Вирус проявляет выборочный (хотя и не исключительный) тропизм к клеткам-предшественникам эритроцитов в костном мозге, что объясняет специфичность определенных клинических проявлений. Тропизм парвовируса В19 к проэритроцитам обусловлен присутствием на их поверхности эритроцитарного антигена P (служащего для В19 первичным рецептором), а также и мало изученного дополнительного рецептора, облегчающего вход вируса в клетку. Эти клетки полностью благоприятны для размножения парвовируса В19, здесь происходит его репродукция, что ведет к разрушению таких клеток, может приводить к понижению числа ретикулоцитов, снижению гематокрита, развитию анемии. Антиген P, помимо предшественников эритроцитов, экспрессируется также на клетках синцитиотрофобласта и цитотрофобласта, мегакариоцитах, эндотелия и фетального миокарда.

При острой инфекции во время виремической фазы вирус обнаруживают:

• в носоглотке;
• в крови (в сыворотке и клетках крови);
• костном мозге;
• печени;
• коже;
• спинномозговой и синовиальной жидкостях;
• эндотелиальных клетках.

Установлена возможность длительной персистенции вируса в различных тканях после первичной инфекции. В неэритроидных тканях инфекция В19, как правило, протекает абортивно. Предполагается, что здесь вирус, даже в отсутствие репликации, проявляет свою патологическую роль посредством косвенных механизмов, таких как индукция воспалительных и аутоиммунных процессов.

Парвовирус В19 обычно вызывает спорадическую заболеваемость, реже приводит к семейным или локальным вспышкам. В странах с умеренным климатом отмечается зимне-весенняя сезонность парвовирусной инфекции, эпидемические подъемы наблюдаются каждые 4-5 лет.

Серопозитивность к вирусу (наличие в крови специфических антител, которые говорят об имевшем место контакте с вирусом) с возрастом увеличивается. В 15-летнем возрасте приблизительно у 50% населения можно обнаружить специфические антитела в сыворотке крови. При этом 30-40% женщин к моменту наступления у них беременности не имеют IgG антител к парвовирусу, что и определяет потенциальную угрозу развития острой инфекции при контакте с вирусом, с риском поражения плода.

Пути передачи инфекции

Источником инфекции является больной человек или вирусоноситель. В настоящее время известны следующие пути передачи парвовируса В19:

• воздушно-капельный (преобладающий, наиболее вероятный);
• вертикальный (от матери к плоду), трансплацентарный;
• трансфузионный (при переливании крови и ее компонентов, особенно при переливании эритромассы);
• при пересадке органов и костного мозга.

Описаны случаи внутрибольничного заражения. Факторами передачи вируса являются слюна, кровь, донорские органы и ткани.

Контагиозность

Больной наиболее заразен в период до появления сыпи.

Предметы, контаминированные секретами больных, также являются реальным фактором передачи инфекции. Основным источником ПВИ являются дети дошкольного и младшего школьного возраста. С учетом устойчивости возбудителя и наибольшей распространенности именно в детской среде, помимо воздушно-капельного, не менее значим и контактный путь заражения

Клинические проявления парвовирусной инфекции

Клинические проявления варьируют от бессимптомных форм до угрожающих жизни состояний. Выраженность их зависит от возраста, гематологического и иммунного статуса.

Выделяют пять форм заболевания:

• инфекционная эритема (пятая детская болезнь с сыпью);
• артропатия (артралгия или артрит);
• транзиторный апластический криз у пациентов с хроническими гемолитическими заболеваниями;
• апластическая анемия у лиц с ослабленным иммунитетом;
• врожденная инфекция, которая может приводить к неиммунной водянке плода, внутриутробной гибели плода или выкидышу.

Парвовирусная В19 инфекция может протекать в острой и хронической форме. Особенностью заболевания является наличие двух периодов болезни.

Первый период начинается через 5-10 суток после заражения (инкубационный период может составлять от 1 до 3 недель) и характеризуется развитием виремии, которая длится от 3 до 7 дней. В эту фазу концентрация вируса в крови достигает максимума и может превышать цифру 1012 вирусных частиц/мл крови. Этот период может протекать бессимптомно (у 20% пациентов) или проявляться отдельными неспецифическими симптомами, напоминающими ОРВИ:

• головной болью;
• лихорадкой;
• ларингитом;
• конъюнктивитом;
• болью в мышцах;
• острой кишечной инфекцией (тошнотой и диареей);
• анемией (у ряда пациентов).

Во втором периоде болезни (примерно через две недели после заражения) у иммунокомпетентных пациентов продуцируются специфические антитела, появляется классическая эритематозная сыпь на щеках, так называемый синдром пощечины. При парвовирусной инфекции могут развиваться кожные высыпания:

• краснухоподобные;
• кореподобные;
• везикулезные.

Эритематозная сыпь (инфекционная эритема) чаще возникает у детей, чем у взрослых. Второй период заболевания у взрослых характеризуется появлением артралгии (артрита), которая в два раза чаще встречается у женщин, чем у мужчин. Артропатии обычно бесследно исчезают через 2-4 недели, но при персистирующей форме парвовирусной инфекции могут сохраняться в течение нескольких лет.

После перенесенного заболевания формируется иммунитет, но есть описания случаев повторного заражения парвовирусом ранее переболевших иммунодефицитных пациентов.

Транзиторный апластический криз во время парвовирусной инфекции может развиваться у детей с гематологическими заболеваниями:

• серповидно-клеточной анемией;
• талассемией;
• наследственным сфероцитозом;
• железодефицитной анемией.

Транзиторный апластический криз для большинства детей – процесс благоприятный, возникает один раз в жизни и в последующем не повторяется.

Беременные

Заболеваемость острой парвовирусной инфекцией B19 среди беременных женщин колеблется в диапазоне 3,3-3,8%. Инфицированная во время беременности женщина передает вирус плоду в 17-33% случаях. Риск неблагоприятного исхода ПВИ у плода при этом является наибольшим в тех случаях, когда инфекция развивается в первые 20 недель беременности.

Парвовирусная инфекция у беременной может привести к выкидышу, внутриутробной гибели или развитию неиммунной водянки плода. Риск потери плода у беременных, инфицированных парвовирусом В19 в первой половине беременности, выше, чем при инфицировании во второй половине беременности. С учетом особенностей образования эритроцитов у плода (печеночный гемопоэз) системное поражение нередко приводит к грубым органным поражениям. Тяжелое течение парвовирусной инфекции имеет неблагоприятный исход. Парвовирус В19 не тератогенен.

Люди с нарушением иммунитета

У людей с ослабленным иммунитетом (больные лейкозами, злокачественными опухолями, врожденными иммунодефицитами, у реципиентов пересаженных органов, ВИЧ-инфицированных больных) парвовирусная инфекция протекает в хронической форме с развитием тяжелой анемии.

Лабораторная диагностика парвовирусной инфекции

Для диагностики острой парвовирусной инфекции у беременных рекомендовано использовать исследование вирусной ДНК в крови и серологические тесты на антитела классов IgM, IgG (см. тесты №№ 85319, 85219). При подозрении на апластическую анемию в числе обследований рекомендовано исследование ДНК парвовируса В19 в крови.

Диагноз парвовирусной инфекции у здоровых детей обычно ставится клинически, потому что сыпь очень характерна. Дифференциальный диагноз проводят с краснухой, при которой макулопапулезная сыпь также начинается на лице. В качестве неинвазивного лабораторного теста в диф.диагностике парвовирусной инфекции у детей (во время виремической фазы), а также в эпидемиологических исследованиях может применяться исследование ДНК парвовируса B19 в мазке со слизистой оболочки ротоглотки или слюне (см. тесты №№ 3324СЛ, 3324РОТ).

Аналитические показатели

• определяемый фрагмент – специфичный участок ДНК Parvovirus В19;
• специфичность определения – 100%;
• чувствительность определения – 100 копий ДНК возбудителя в образце.

С какой целью выполняют исследование

Для детекции ДНК парвовируса В19 сыворотка крови служит наиболее подходящим материалом, так как вирус поражает клетки-предшественницы эритроцитов крови. Наряду с детекцией ДНК вируса сыворотка крови используется для определения специфических антител.

Что следует учесть при выполнении исследования

ПЦР является основой лабораторной диагностики парвовирусной инфекции В19, поскольку это быстрый и точный метод. Получение отрицательного результата ПЦР у иммунокомпетентных пациентов не исключает диагноз парвовирусной инфекции В19, поскольку в период появления клинических симптомов виремия, как правило, прекращается (в этот период в соскобе эпителиальных клеток слизистой ротоглотки ДНК парвовируса может содержаться в большей концентрации, чем в крови). Кроме того, низкий уровень ДНК парвовируса B19 может определяться в сыворотке крови в течение нескольких месяцев после заражения, поэтому серологические реакции в данном случае остаются диагностическим методом выбора у иммунокомпетентных пациентов.

Пациенты с хронической парвовирусной инфекцией В19, при апластическом кризе и лица с ослабленным иммунитетом не способны вырабатывать необходимые для постановки теста уровни антител, поэтому не серология, а обнаружение ДНК парвовируса является методом выбора для подтверждения диагноза у таких больных.