Вирус иммунодефицита человека, количественное определение РНК

ПЦР анализ на ВИЧ, определение РНК (кол.) в сыворотке крови

Количественное определение РНК вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1 (Human immunodeficiency virus HIV-1) в плазме крови методом ПЦР проводится с целью определения уровня содержания наличествующего в крови вируса иммунодефицита человека. Исследование необходимо для наблюдением за протеканием ВИЧ-инфекции, рационального решения вопроса о необходимости проведения антиретровирусной терапии и последующего ее мониторинга, а также оценки результативности выполненных лечебных мероприятий, оценки прогрессирования заболевания и составления прогноза. 

Характеристики исследования:

• Тип биоматериала: венозная кровь
• Синонимы (rus): уровень содержания РНК ВИЧ-1 в крови
• Синонимы (eng): Human immunodeficiency virus-1
• Метод исследования: полимеразная цепная реакция

ВИЧ-инфекция представляет собой заболевание, вызываемое вирусом иммунодефицита человека, которое поражает иммунную систему и приводит к ее разрушению. Это в свою очередь становится причиной возникновения оппортунистических инфекций и развития злокачественных новообразований.

Вирус иммунодефицита человека обладает собственным РНК и причислен к семейству ретровирусов. Выделяют ВИЧ-1 и ВИЧ-2, при этом в качестве основного возбудителя соответствующей инфекции и соответственно СПИДа выступает ВИЧ-1, в то время как 2-й тип ВИЧ-инфекции является малораспространенным.

Конечной, завершающей стадией развития ВИЧ-инфекции выступает СПИД, при котором иммунная система оказывается настолько пораженной, что становится не в состоянии оказывать сопротивление любым инфекционным агентам. Любой инфекционный процесс может явиться причиной развития тяжелого заболевания или даже привести к летальному исходу. На сегодняшний день в мире отмечается стремительный рост заболеваемости ВИЧ-инфекцией. Заболевание имеет различные пути передачи, однако наиболее распространенным является инфицирование вследствие незащищенного полового контакта. Кроме того, ВИЧ-инфекция может передаваться в период беременности, во время естественных родов, а также при лактации, поскольку материнское молоко также содержит в себе вирусные частицы. Часто заражение происходит при использовании нестерильных игл и инструментов (например, при проведении косметических процедур, медицинских вмешательств), редко, но все же возможно – при переливании крови. Поскольку вирусные частицы, находясь вне клеток или жидкостей человеческого организма, погибают, инфицирование вследствие поцелуев, бытовых контактов, укусов насекомых, пользовании общими предметами обихода невозможно.

В группу риска входят люди, которые практикуют незащищенные сексуальные контакты, лица, употребляющие наркотические средства путем их внутривенного введения в организм, а также пациенты, страдающие заболеваниями, имеющими половой механизм передачи.

Когда назначают анализ

Проведение лабораторной диагностики крови, направленное на определение количественного уровня вируса иммунодефицита человека, назначается квалифицированными врачами различных специальностей в таких случаях, как:

• мониторинг течения ВИЧ-инфекции;
• принятие решения о проводимости антиретровирусной терапии или нецелесообразности таковой;
• контроль результативности лечения, оценка лечебных мер;
• составление прогноза ВИЧ-инфекции и вероятности прогрессирования патологического процесса;
• решение вопроса о проведении кесарева сечения по медицинским показаниям (для беременных женщин, инфицированных вирусом иммунодефицита человека).

Данное лабораторное исследование крови не показано для первичной диагностики ВИЧ-инфекции, оно назначается пациентам с уже подтвержденным диагнозом.

Подготовка к анализу

Оптимальное время проведения анализа – утро, а именно промежуток между 8 и 11 часами. Кровь необходимо сдавать натощак. В день процедуры забора крови пациенту разрешено пить воду, все прочие напитки и продукты подпадают под запрет. Ужинать в преддверии анализа желательно легкими продуктами, не перегружающими работу пищеварительного тракта. Стоит отдавать предпочтение свежим фруктам, овощам, молочным изделиям. В назначенную дату исследования стоит отказаться от курения. 

Кроме того, необходимо соблюсти ряд иных ограничительных мероприятий, направленных на получение достоверного результата, а именно:

• за двое суток не употреблять пищу с высоким содержанием жиров. При пренебрежении данной рекомендацией возрастает вероятность попадания в кровь жировых частиц и как следствие возникновение хилеза крови, препятствующего ее тщательному лабораторному изучению;
• за сутки не употреблять алкогольные напитки (в том числе слабоалкольные);
• минимизировать физические нагрузки и активность (е выполнять тяжелую работу, не поднимать тяжести, не посещать фитнес-центры, тренажерные залы и т.п.), контролировать эмоциональное состояние, беречься от эмоциональных всплесков, стресса.

Исследование проводится по предъявлению пациентом паспорта. Допустимо и анонимное выполнение исследования (в направительном бланке не обозначаются персональные данные, а присваивается определенный цифровой код), однако полученные результаты в таком случае нельзя будет предъявить врачу.

Взятие биологического материала рекомендуется осуществлять до начала приема противовирусных средств, антибактериальных препаратов и иммуномодуляторов. Желательно избегать гемолиза.

Методика проведения анализа

Количественный подсчет РНК вируса иммунодефицита человека возможен только при тщательном лабораторном изучении образца венозной крови обследуемого. Процедуру отбора биообразца проводит медработник, имеющий необходимую квалификацию и опыт. В приоритете - соблюдение правил антисептики и асептики, что имеет важнейшее значение для безопасности пациента. Обследуемый занимает комфортное для него сидячее положение, после чего медработник выполняет венепункцию. Полученную кровь, содержащуюся в шприце, переносят в пробирку, а затем подвергают биологический материал процедуре центрифугирования. Отделенную вследствие данной процедуры плазму исследуют посредством методики полимеразной цепной реакции, которая обеспечивает возможность выявления участка РНК исследуемого вируса и выполнения его многократного копирования. Это позволяет из единичных клеток вируса получить достаточный для исследования объем РНК, судить о наличии в крови генетического материала вируса иммунодефицита человека и его количественных параметрах. Анализ считается информативным, точным и достоверным.

Расшифровка анализа на ВИЧ

Результат выдается в количественном формате. Интерпретацией полученных значений должен заниматься врач. В качестве единицы измерения в данном исследовании выступает количество обнаруженной РНК вируса, выраженное в копии на 1 миллилитр.

При отсутствии в представленном образце генетического материала ВИЧ констатируется отрицательный результат, который является нормой. Также такой результат может быть вследствие наличия вируса в крови ниже границы чувствительности тестовой системы.

При выявлении РНК ВИЧ в количестве менее 40 копий/мл указывается, что искомая РНК обнаружена в количестве на пределе чувствительности способа исследования, при этом количественная характеристика невозможна. Содержание в исследуемой крови РНК ВИЧ в диапазоне от 40 копий/мл до 1*107 копий/мл специалисты констатируют, что полученное значение укладывается в границы линейного диапазона, полученный результат расценивается как достоверный.  В случае, когда уровень содержания РНК ВИЧ-1 выявлен в количестве более *107 копий/мл, при интерпретации результата указывается, что данное значение выходит за верхнюю границу линейного диапазона.

Результаты текущего количественного анализа на ВИЧ-1 важно соотносить с предыдущими аналогичными показателями. Так, при снижении уровня содержания вирусных частиц констатируют эффективность проведенных лечебных мероприятий, в то время как при повышении данных показателей говорят об прогрессировании вируса иммунодефицита человека.