Диагностика гемолитической анемии, ассоциированной с недостаточностью пируваткиназы (экзоны 3,5,7,8,10,11 гена PKLR) (Diagnosis of hemolytic anemia associated with pyruvate kinase deficiency (exons 3,5,7,8,10,11 of the PKLR gene))

Краткое описание исследования «Диагностика гемолитической анемии, ассоциированной с недостаточностью пируваткиназы (экзоны 3, 5, 7, 8, 10, 11 гена PKLR)»

Наследственная несфероцитарная гемолитическая анемия вследствие дефицита пируваткиназы – наиболее распространенная среди всех ферментопатий эритроцитов. Фермент пируваткиназа (ПК) необходим для последней ключевой стадии гликолиза – образования енольной формы пирувата и аденозинтрифосфата (АТФ). Недостаточное количество АТФ напрямую влияет на продолжительность жизни эритроцитов, сокращая ее. Наследственная несфероцитарная гемолитическая анемия вследствие дефицита пируваткиназы – наиболее распространенная среди всех ферментопатий эритроцитов. Дефицит ПК является аутосомно-рецессивным заболеванием в результате гомозиготных и компаунд-гетерозиготных мутаций в гене PKLR. Распространенность заболевания выше среди представителей европеоидной расы, особенно в Европе и Северной Америке, и в среднем составляет 5:100 000 (1:20 000).

Клинические проявления дефицита пируваткиназы появляются уже в детском возрасте и включают в себя признаки хронического гемолиза: анемию различной степени тяжести, иктеричность кожных покровов и склер, спленомегалию и/или гепатоспленомегалию. Степень анемии варьирует от легкой или полностью компенсированного гемолиза до тяжелой трансфузионно-зависимой анемии с развитием гиперспленизма, желчекаменной болезни и перегрузки железом. Клинические проявления анемии имеют тенденцию исчезать с возрастом, а течение заболевания часто становится относительно стабильными во взрослом возрасте, хотя в результате стресса, острых инфекций или беременности могут возникать гемолитические кризы, требующие трансфузионной поддержки.

Диагноз дефицита ПК основывается на наличии клинических признаков и симптомов, лабораторных маркеров гемолитической анемии, сниженной ферментативной активности ПК и обнаружении мутаций в гене PKLR.

В общем анализе крови отмечается анемия от легкой до тяжелой степени тяжести (концентрация гемоглобина – 65-110 г/л), с анизоцитозом, пойкилоцитозом эритроцитов, ретикулоцитозом. В тяжелых случаях единичные эритробласты могут наблюдаться в мазке периферической крови как следствие неэффективного эритропоэза. В биохимическом анализе крови отмечаются характерные признаки гемолиза: снижение гаптоглобина, гипербилирубинемия (в среднем, около 60 мкмоль/л), при этом активность ЛДГ, как правило, в норме.

Ферментативная активность ПК обычно определяется в лизатах эритроцитов с помощью спектрофотометрического анализ. В типичных случаях активность фермента у гомозигот составляет менее 25% и у гетерозигот 40-60%.

Идентифицировано более 300 различных мутаций гена PKLR, являющихся причиной хронической гемолитической анемии. Заболевание наследуется аутосомно-рецессивно, в его основе лежат гомозиготные или компаунд-гетерозиготные мутации в гене PKLR. Около 70% составляют миссенс-мутации. За исключением некоторых этнических групп мутации характеризуются большой разнородностью и редко повторяются, примерно у 25% пациентов описывают впервые обнаруженные мутации.

Наиболее распространенными миссенс-мутациями являются 1529G>A в США и Европе, 1456C>T в Южной Европе и 1468C>T в Азии. Другие мутации, в частности, 721G>T и 994G>A, присутствуют у европейцев с меньшей частотой.

Тяжелая гемолитическая анемия развивается при наличии мутаций 994G>A, 1091G>A, 1168G>A, 1594C>T, 1436G>A, 1529G>A.

С какой целью выполняют исследование

Тест используется с целью дифференциальной диагностики гемолитической анемии и анемии, ассоциированной с недостаточностью пируваткиназы.