ПЦР анализ на болезнь легионеров: сдать анализ в Сочи

Медицинская значимость анализа

Исследование фаринго-трахеальной мокроты проводится методом ПЦР, который позволяет увеличить число ДНК возбудителя с целью лёгкого его обнаружения. В его основе лежит многочисленный рост копий-фрагментов ДНК, характерных для Legionella pneumophila.

Анализ успешно применяется при:

• диагностике пневмонии в совокупности с показателями повышенного риска инфицирования;
• комплексном обследовании на легионеллёз.

Тест ПЦР идеально подходит для определения возбудителя Legionella, так как в условиях стандартных сред он не размножается. Используя его, можно идентифицировать факты носительства, а также прогрессирование инфекции в период острой фазы заболевания.

ПЦР-диагностика индуцированного секрета ценна при детекции инфекций нижнего отдела дыхательных путей. Когда у пациента невозможно получить аспират для анализа, в решении относительно дальнейшей терапии нужно руководствоваться полом, возрастом человека, наличием / отсутствием факторов риска, а также наиболее распространённой формой болезни.

Важно! Качественные ПЦР-системы для выявления бактерии легионеллёза должны быть одобренными ВОЗ и официально зарегистрированными, а медицинские центры, которые с ними работают, – аккредитованными.

Требования к сбору индуцированной мокроты из лёгких

При диагностике легионеллёза анализируется выделяемая из лёгких мокрота. Чтобы собрать качественный материал, необходимо следовать следующим правилам:

1. Забор секрета производится в утренние часы на голодный желудок. Мокрота собирается в стерильную баночку с крышечкой. Такую ёмкость можно купить в аптеке или получить заблаговременно в лабораторном центре.
2. В момент очередного откашливания отхаркнуть лёгочный секрет в ёмкость, после чего плотно закрыть крышкой. Хранить баночку открытой нельзя, т. к. в биоматериал может попасть инфекция извне, что приведёт к недостоверному результату.
3. Сразу же после сбора секрет следует как можно быстрее доставить в лабораторию для исследования.
4. В случае когда у человека затруднено откашливание лёгочного секрета, для разжижения мокроты и облегчения его выхода предварительно нужно выпить муколитический препарат.

Выделение ДНК (РНК) из исследуемого материала

При болезни легионеров на исследование берётся слизь из нижних дыхательных путей. На материал, содержащий клетки искомого возбудителя, оказывается воздействие поверхностно-активными веществами или высокой температурой, так как необходимо разрушить клеточную мембрану. После лизиса ДНК отделяют от прочих клеточных элементов.

Правила забора фаринго-трахеального секрета на исследование

Для проведения диагностики фаринго-трахеального аспирата с помощью ПЦР потребуется утренний сбор мокроты. Её отбирают в специальный контейнер с плотно фиксирующейся крышкой в диагностическом центре. Главная задача – получение непосредственно мокроты, а не слизи / слюны.

Перед забором биоматериала нужно нормализовать дыхание, чтобы лёгкие наполнились воздухом. Для этого человеку рекомендуется сесть, слегка опустить плечи. Важно сделать глубокий вдох, задержать на несколько секунд дыхание, затем глубоко выдохнуть воздух из лёгких. Выполнить 5 таких вдохов. Сделать в течение суток накануне дня проведения процедуры 2-3 подхода.

Взятие образца аспирата из нижнего отдела дыхательных путей происходит через 2-4 часа с момента последнего употребления пищи. Непосредственно перед исследованием (за 1 час до диагностики) пациенту следует воздержаться от курения, очищения ротовой полости и зубов. За 6 часов до манипуляции запрещено орошать полость рта лекарственными, дезинфицирующими спреями, рассасывать пастилки, закапывать в нос и горло аэрозоли, капли.

Перед забором на анализ аспирата прополоскать ротовую полость тёплой кипячёной водой. В случае когда нос заполнен слизью, перед процедурой следует высморкаться.

Из образцов фаринго-трахеального аспирата, полученных из нижнего отдела дыхательных путей, изначально в лабораторных условиях создают окрашенный по Грамму препарат. При содержании в нём менее десяти полиморфонуклеарных лейкоцитов и более десяти плоских эпителиальных клеток такой секрет классифицируется как слюна, вследствие чего материал не подлежит молекулярно-биологическому исследованию.

Обратите внимание! Так как получение мокроты отхаркиванием у младенцев, новорожденных, детей до 6 лет невозможно, биоматериал для исследования у них получают из верхнего отдела дыхательных путей. Диагностика анаэробных бактерий в таком секрете не проводится, поскольку исследуемый образец контаминирован анаэробами катара дыхательных путей, являющимися частью их естественной микрофлоры.

Амплификация (умножение) участков ДНК

Выделенные фрагменты ДНК помещают в пробирку и добавляют реактивы. Далее пробирку отправляют в амплификатор – прибор, способный циклически поддерживать перепады температур. В результате температурного воздействия двухцепочечная молекула ДНК разделяется.При участии фермента ДНК-полимеразы и специфических нуклеотидных последовательностей (праймеров) идёт достраивание новых фрагментов ДНК. Этот процесс носит название элонгации. Удлинение молекулы ДНК идёт по принципу комплементарности.

Полимеразная цепная реакция заключается в том, что полученные цепи ДНК становятся матрицей для синтеза фрагментов нуклеиновых кислот в новом цикле. После 30-40 циклов амплификации образуется столько молекул ДНК, что их можно наблюдать визуально с помощью флюоресцентного красителя.

Специфичность ПЦР-диагностики

Анализ эффективности разных методик тестирования представляет собой сложную задачу, т. к. нет единого стандарта диагностики Legionella pneumophila. Популярный BinaxNOW®UAT обнаруживает лишь вид 1-ой серогруппы L. pneumophila, тогда как культуральный тест не используется по причине низкой резистентности.

Метод ПЦР отличается высокой чувствительностью. В отличие от бактериологического анализа этот тип исследования способствует ускорению диагностирования легионеллёзной пневмонии на 3-4 дня. Он даёт возможность найти в анализируемом материале фрагмент ДНК возбудителя, а также выявить поодинокие молекулы бактерии Legionella, которые невозможно обнаружить с помощью других способов. Чувствительность и быстрота исследования позволяют диагностировать различные виды Legionella в образцах из экологических и клинических источников.

Восприимчивость теста ПЦР в сравнении с культуральными методами составляет 100 %. В то же время, как и культуральный метод, ПЦР может обнаруживать все серогруппы легионеллы.

Визуализация продуктов ПЦР

Для обнаружения полученных нуклеиновых кислот проводят агарозный гель-электрофорез. В геле содержится краситель – бромидэтидия, который связывается с ДНК и флюоресцирует в УФ-лучах. В результате на уровне искомой ДНК будет видна оранжевая полоска.

Обнаружение ДНК легионеллы методом ПЦР говорит о присутствии возбудителя в организме, но диагноз принято считать предположительно верным. Достоверность полимеразной цепной реакции составляет от 95% до 100%, однако отсутствие искомого ДНК в исследуемом материале не исключает наличие инфекции.

Насколько достоверный анализ?

Отсутствие деления генетического материала возбудителя в тестируемой пробе не всегда свидетельствует об отсутствии патогена. Иногда встречаются и ложные результаты.

Среди основных причин присутствия бактерии Legionella в человеческом организме выделяют: предшествующую исследованию антибактериальную терапию, наличие паразитов, вирусов, грибов, микобактерий, посторонних загрязнений в диагностируемом образце. В 40-60 % случаях заражения нижнего отдела дыхательных путей инфекция остаётся не выявленной.

Неправдивый результат ПЦР на определение ДНК легионеллы может быть получен в результате загрязнённых реагентов.

ПЦР анализ на болезнь легионеров: цена и запись в Сочи

Исследование выполняется в клинике «Медальянс» по адресу Сочи, улица Пластунская, 181Г. Стоимость — 680 ₽, срок готовности — 2–3 дня.

Приём и сдача анализов идут без выходных: с понедельника по пятницу с 7:00 до 16:00, в субботу и воскресенье с 7:30 до 16:00. Запись оформляется на этой странице или по телефону +7 (965) 483-31-14. Администратор подтвердит удобное время и подскажет, как подготовиться.

Информация носит справочный характер. Имеются противопоказания, необходима консультация специалиста.